La versione del gioco per PlayStation 4 supporta il multiplayer sia locale che online tramite la funzione "Share Play" di PS4. (La versione per Playstation 4 può anche supportare fino a 4 giocatori. ) I giocatori cooperativi possono partecipare in qualsiasi momento come un bambino casuale, prendendo un contenitore del cuore rosso da Isaac e dandolo al secondo giocatore.
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